张晓云   宋智娟

（河北农业大学动物科技学院）

 

摘要：本试验研究了葡萄糖氧化酶对产蛋鸡盲肠肠道菌群的影响。试验采用单因子试验设计，选择26周龄海兰褐蛋鸡180只，随机分为5组，每组4个重复，每个重复9只鸡。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组在基础日粮中分别添的0、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％的葡萄糖氧化酶。预饲期一周，试验期为6周，试验结束时从各重复中随机取一只鸡采血、宰杀，测定盲肠内容物大肠杆菌和乳酸杆菌。.试验结果表明：蛋鸡日粮中添加葡萄糖氧化酶可以提高盲肠内容物中乳酸杆菌的数量，降低大肠杆菌的数量。葡萄糖氧化酶添加组能促进盲肠内容物中乳酸杆菌的增殖，抑制盲肠内容物中大肠杆菌繁殖（P<0.01），其中以0.4％添加组的作用最明显。

关键词：葡萄糖氧化酶；蛋鸡；盲肠肠道菌群

 

Effects of Glucose Oxidase on Caecum Microorganism of Laying Hens

ZhangXiaoyun   SongZhijuan

（College of Animal Science and Technology, Agricultural University of Hebei）

Abstract：This experiment was to investigate the effect of glucose oxidase on caecum microorganism of laying hens. 180 twenty-six-week-old Hyline layers were randomly allotted to 5 treatments, each treatment represented by 4 replicates of 9 birds each. laying hens in treatments Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ and Ⅴ received basal diets with the addition of 0,0.1％,0.2％,0.3％,0.4％ glucose oxidase. The experiment lasted six weeks. E. coli and lactobacillus in caecum contents of laying hens were tested. The results were as follows: Laying Hens fed glucose oxidase increased the quantity of the lactobacillus and restrained the E.Coli in caecum contents (P<0.01),and the addition of 0.4% glucose oxidase was the most effective.

Key words: Glucose oxidase; Laying hens; Caecum microorganism

饲用酶制剂是目前被认为使用最安全的一种饲料添加剂，它是微生物发酵的天然产物，被称之为“绿色”添加剂（汪儆，1997）。由保定鲜尔康生物工程有限责任公司生产的鲜尔康，即饲用葡萄糖氧化酶是一种新型抗氧化酶制剂，1999年被我国农业部批准为“允许使用的饲料添加剂”。葡萄糖氧化酶的pH值适用范围2.2～8.0，耐110℃～130℃高温，大大提高了酶的使用范围。

早在1904年，人们就发现了葡萄糖氧化酶。直到1928年Muller进一步通过试验才肯定了其酶的作用，把它归入脱氢酶。此后Nakamatsu、Konelia、Yoshio先后对其作了大量的研究，1961年国际生化协会酶委员会将该酶的系统名称叫做β-D-葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase简写GOD)编号为E.C.1134。

葡萄糖氧化酶在氧分子存在下能氧化葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢。因此从理论上讲葡萄糖氧化酶促生长的作用机理应为：（1）消除肠道病原菌生存环境，保持肠道菌群生态平衡；（2）改善肠道酸性消化环境；（3）保护肠道上皮完整；（4）解除肠道霉菌毒素中毒。

然而，葡萄糖氧化酶作为饲料添加剂，在畜禽生产上的应用试验性报道较少，且基本集中在肉鸡上，因此研究葡萄糖氧化酶对蛋鸡的作用机制，对完善葡萄糖氧化酶在畜禽生产中作用的基础理论以及在畜禽业中的推广应用具有重要意义。本试验研究了鲜尔康对蛋鸡血清生化指标的影响，探讨葡萄糖氧化酶制剂的作用机理，并确定出适宜的添加剂量，为其在蛋鸡生产中的应用提供了理论依据。

一、材料与方法

1、试验动物

26周龄海兰褐蛋鸡，鸡雏购自石家庄华牧牧业有限责任公司。

2、试验材料

鲜尔康（饲用葡萄糖氧化酶），由保定鲜尔康生物工程有限责任公司生产，添加前，先以基础日粮为载体做成1％葡萄糖氧化酶预混剂，再按添加量和基础日粮混合后使用。

3、试验设计

本试验采用单因子随机分组试验设计。选取体重均匀、采食良好、产蛋率相近，26周龄的海兰褐蛋鸡180只，随机分为5组，每组设4个重复，每个重复9只鸡。以玉米-豆粕-杂粕型日粮为基础日粮。其中1组为对照组，饲喂基础日粮，2、3、4、5组分别在基础日粮中添加不同剂量的鲜尔康。设计方案见表1。

 

4、饲养管理

饲养试验在石家庄益生饲料有限公司蛋鸡实验养殖场进行。试验鸡舍为半开放鸡舍，采用三层全阶梯式笼养，自然通风，自然光照和人工补充光照相结合，每天光照16h，光照强度10～15LX。每天喂料三次(7:30，13:30，16:30)，记录7:00，13:30，17:30舍内温度和湿度，每日观察鸡群健康情况，认真作好试验记录。四天一次清粪，一周一次消毒。试验经一周的预试期进入正试期，试验期42天。

5、试验日粮

本试验以玉米-豆粕-杂粕型日粮为基础日粮。日粮组成及营养水平见表2。

每公斤微量元素成分含量为：铜8g，铁55g，锌60g，锰60g，硒115mg，碘350mg。

营养水平中粗蛋白、钙、总磷为实测值，其余成分为计算值。

6、血清学指标

饲养试验结束时，从每个重复中随机取一只蛋鸡，空腹颈静脉采血，室温静置，待部分血清析出后，将凝血离心管置于离心机中，4000r/min离心15分钟分离血清，用滴管吸取上清液（血清）转移到血清分析样品管中，放入-20℃冰箱中保存。用于检测血清中总胆固醇、钙、磷、碱性磷酸酶、总蛋白、白蛋白、球蛋白、甘油三酯、肌酸激酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶等血清学指标。

所用仪器：均为Microlab 300半自动生化分析仪，由保定市人民医院提供。

总胆固醇、甘油三酯所用检测方法为酶偶联比色法，试剂由浙江东瓯生物工程有限公司生产；

血清钙所用检测方法为终点法，试剂由北京北化康泰试剂有限公司生产；

血清磷、血清总蛋白、血清白蛋白所用检测方法为终点法，试剂由中生北控生物科技有限公司生产；

碱性磷酸酶、肌酸激酶、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶所用检测方法为连续监测法，试剂由中生北控生物科技有限公司生产。

7、数据处理

试验数据采用SPSS数据处理软件进行单因素方差分析，用LSD法进行多重比较。

二、试验结果

1、日粮中添加鲜尔康对蛋鸡血清总蛋白、白蛋白和球蛋白的影响

日粮中添加鲜尔康对蛋鸡血清总蛋白、白蛋白和球蛋白的影响见表3。

日粮中添加鲜尔康能提高蛋鸡血清总蛋白、白蛋白和球蛋白的含量。对照组总蛋白的含量与0.4％鲜尔康添加组之间差异显著（P<0.05），与0.1％、0.2％和0.3％鲜尔康添加组之间差异不显著（P>0.05），各鲜尔康添加组之间差异不显著(P>0.05)。2、3、4、5组与1组相比，总蛋白的含量分别提高4.94％，19.96％，24.90％，29.46％。

对照组白蛋白的含量与0.4％鲜尔康添加组之间差异极显著(P<0.01)，显著低于0.2％和0.3％鲜尔康添加组（P<0.05），与0.1％鲜尔康添加组之间差异不显著（P>0.05）。各鲜尔康添加组之间除了0.1％与0.4％鲜尔康酶添加组之间差异显著外（P<0.05），其余各组之间差异不显著（P>0.05）。2、3、4、5组与1组相比，白蛋白的含量分别提高3.68％，9.52％，12.28％，17.53％。

对照组球蛋白含量最低，但是与各试验组之间差异不显著(P>0.05)，2、3、4、5组与1组相比，白蛋白的含量分别提高5.52％，24.78％，30.72％，34.97％。

试验结果表明：各试验组鸡对白蛋白的吸收量增加，但球蛋白吸收量无显著变化。

2、日粮中添加鲜尔康对蛋鸡血清钙、磷含量和碱性磷酸酶活性的影响

日粮中添加鲜尔康对蛋鸡血清钙、磷和碱性磷酸酶含量的影响见表4。

日粮中添加鲜尔康能提高蛋鸡血清钙、磷和碱性磷酸酶的含量。对照组血清钙的含量最低，0.2％鲜尔康添加组血清钙的含量最高。对照组和鲜尔康添加组之间差异不显著。2、3、4、5组与1组相比，血清钙的含量分别提高5.87％，12.47％，7.09％，8.80％。

对照组血清磷的含量最低，0.3％鲜尔康添加组血清磷的含量最高。对照组和鲜尔康添加组之间差异不显著（P>0.05）。2、3、4、5组与1组相比，血清磷的含量分别提高6.57％，14.14％，27.27％，26.26％。

对照组碱性磷酸酶的含量最低，0.2％鲜尔康添加组碱性磷酸酶的含量最高。对照组和鲜尔康添加组之间差异不显著（P>0.05）。

3、日粮中添加鲜尔康对蛋鸡血清总胆固醇和甘油三酯水平的影响

日粮中添加鲜尔康对蛋鸡血清总胆固醇和甘油三酯水平的影响见表5。

日粮中添加鲜尔康对蛋鸡血清总胆固醇和甘油三酯水平没有显著影响(P>0.05)，但有减少的趋势。对照组总胆固醇含量最高，0.2％鲜尔康添加组含量最低，对照组和鲜尔康添加组之间差异不显著（P>0.05）。

对照组甘油三酯含量最高，0.4％鲜尔康添加组含量最低，对照组和鲜尔康添加组之间差异不显著（P>0.05）。

4、日粮中添加鲜尔康对蛋鸡血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶和肌酸激酶活性的影响

日粮中添加鲜尔康对蛋鸡血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶和肌酸激酶活性的影响见表6。

日粮中添加鲜尔康对蛋鸡血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶的活性没有显著影响（P>0.05）。对照组谷草转氨酶的活性最低，0.4％鲜尔康添加组活性最高，对照组和鲜尔康添加组之间差异不显著（P>0.05）。2、3、4、5组谷草转氨酶的活性分别比对照组提高1.20％、13.93％、14.05％和15.49％。

对照组谷丙转氨酶的活性最低，0.2％鲜尔康添加组活性最高，对照组和鲜尔康添加组之间差异不显著(P>0.05)。2、3、4、5组谷草转氨酶的活性分别比对照组提高23.17％、38.94％、31.35％和35.67％。

对照组肌酸激酶活性最高，显著高于0.4％鲜尔康添加组（P<0.05），与0.1％、0.2％和0.3％鲜尔康酶添加组之间差异不显著（P>0.05）。各鲜尔康添加组之间差异不显著(P>0.05)。

三、分析与讨论

1、鲜尔康对蛋鸡血清总蛋白、白蛋白和球蛋白含量的影响

本试验研究结果显示，在日粮中添加鲜尔康能显著提高蛋鸡血清中总蛋白和白蛋白含量，对血清中球蛋白含量也有所提高。血清总蛋白和白蛋白含量的增加，表明体内蛋白质的合成代谢加强。由此推测鲜尔康提高总蛋白、白蛋白和球蛋白的机制可能是葡萄糖氧化酶抑制了大肠杆菌的生长，改善了肠道环境，提高了肝脏功能，从而改善和提高蛋鸡饲料中营养物质的吸收作用，为体内蛋白质的合成提供了足够的原料，使蛋白质的合成速度增加。血清总蛋白含量的提高，保证了机体蛋白质的供给。机体蛋白质合成代谢加强，有利于机体的正常生长发育。

2、鲜尔康对蛋鸡血清钙、磷含量和碱性磷酸酶活性的影响

血钙几乎全部存在于血清中，故血钙即指血清钙。血液含钙量虽不及总钙的1％，却有很重要的生理作用。

蛋壳钙化与钙代谢和血清钙水平有密切关系，母鸡所需要钙的绝大部分（95.5～95.8％）被用于形成蛋壳和蛋内容物，而蛋壳形成所需要的钙直接来源于血液和骨骼，因此母鸡缺钙严重时，血清钙降低。血钙直接参与蛋壳的形成，是影响蛋壳质量和产蛋量的因素之一。血清中钙含量高是产生优质蛋壳的主要因素。

大部分磷（70%～80%）是以不溶解的磷酸钙形式存在于骨骼中，其余部分构成重要的有机化合物，如磷脂、核苷酸等存在于细胞内。磷具有重要的生理功能。

血液无机磷含量与碱性磷酸酶活性等是衡量磷充足与否的重要指标。血清AKP是一组同工酶，主要来源于小肠的占20％。碱性磷酸酶的专一性不强，能作用于多种底物。血清中具有各组织来源的碱性磷酸酶，能反映许多组织的代谢情况，在蛋鸡体内与钙磷代谢有关，当产蛋鸡钙需要量增多时，碱性磷酸酶有催化骨组织释放钙而满足机体需要的功能。说明碱性磷酸酶有利于产蛋，酶活性高的个体生产性能也高。Wilcox发现鸡血清碱性磷酸酶（AKP）活性的高低与产蛋性能有一定关系。

日粮中添加鲜尔康对血清钙、磷水平和碱性磷酸酶活性有所提高，由于葡萄糖氧化酶中的葡萄糖氧化酶在氧分子存在下能氧化葡萄糖生成δ-葡萄糖酸内酯，进一步水解成葡萄糖酸和过氧化氢，从而使肠道内容物pH值降低，而偏酸的环境有利于被结合或螯合的矿物元素以游离态释放，从而提高了钙、磷的利用率。同时，碱性磷酸酶也参与钙磷代谢，与钙磷的沉积密切相关。本试验中，钙磷水平的变化与碱性磷酸酶活性变化趋势一致，都因葡萄糖氧化酶的添加而提高，表明体内钙磷代谢增强，钙磷的沉积作用得到改善。因此饲料中添加鲜尔康有利于改善蛋壳品质，减少软破蛋率，提高经济效益。

3、鲜尔康对蛋鸡血清总胆固醇和甘油三酯水平的影响

研究鸡体脂肪代谢规律了解到：血清甘油三酯和总胆固醇的浓度可以反映鸡体脂肪合成、分解的情况。血清中甘油三脂是脂类代谢中一种重要的中间代谢产物，可以反映出脂类代谢状况，当禽类消化吸收不良时，甘油三酯是明显下降的。甘油三酯首要的功能是为细胞供能。肝脏、脂肪组织及小肠是合成甘油三酯的主要场所，以肝脏合成能力最强。甘油三酯主要存在于前 β-脂蛋白和乳糜微粒中，直接参与胆固醇和胆固醇酯的合成。胆固醇是动物重要的类脂之一，主要在肝细胞由糖、脂肪和氨基酸分解的共同产物——乙酰辅酶A转化合成，具有重要的生理作用。

本试验结果表明，日粮中添加鲜尔康对血清中总胆固醇和甘油三酯均有降低的趋势，但各组之间差异不显著。说明鲜尔康对鸡体脂肪的合成与分解作用不明显。

4、鲜尔康对蛋鸡血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶和肌酸激酶活性的影响

谷草转氨酶和谷丙转氨酶是动物体内分布最广、活力最大的两种酶，谷丙转氨酶的作用是在动物体内通过转氨基作用，使L-丙氨酸和α-酮戊二酸生成丙酮酸和谷氨酸。此反应可逆。谷草转氨酶的作用主要是使谷氨酸和草酰乙酸反应生成天冬氨酸。这种酶活性的提高可能有利于动物体内氨基酸的合成。因此，谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活力不仅可以反映肝脏和心脏功能的状况，而且可在一定程度上反映体内蛋白质的代谢情况。这两种酶活力的提高说明蛋白质代谢率的提高。所以谷草转氨酶、谷丙转氨酶活力的增强有利于蛋白质代谢率的提高。然而这两种酶活性过高就意味着肝脏和心脏可能有损害。本试验结果显示，日粮中添加鲜尔康对谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性有提高的趋势，但是各组之间差异并不显著。说明添加鲜尔康有利于蛋白质代谢的提高，而对产蛋鸡肝脏和心脏均无损害作用。

肌酸激酶（CK）是一种器官组织特异性酶，主要存在于肌肉细胞中，其功能为催化三磷酸腺苷中的高能磷酸键转移到肌酸上，生成磷酸肌酸而贮存能量。在各种原因造成的应激条件下，蛋鸡采食量减少、糖原降低、肌肉细胞能量供应不足，导致肌肉能量供应不足，肌肉细胞营养不良并造成其细胞损伤及其渗透性增加，肌肉细胞中CK逸出，从而使血液CK浓度升高。本试验结果表明，日粮中添加鲜尔康降低了血液中肌酸激酶的活性，其原因可能在于，葡萄糖氧化酶有利于清除体内产生的氧自由基，减轻肌细胞膜过氧化程度，降低因过氧化而受到损伤肌细胞膜的通透性，使渗出的CK减少，降低CK活性。

四、结论

鲜尔康能明显提高总蛋白和白蛋白的含量、降低肌酸激酶的活性。对其它血清生化指标有一定的作用，但效果不太明显。